Kursdetails
Überblick
Dieses intensive dreitägige Praxistraining führt in den gesamten Arbeitsablauf von Western Blot und Proteinanalyse ein – von der Probenvorbereitung bis zur Signaldetektion und Datenauswertung.
Der Kurs behandelt die wesentlichen theoretischen und praktischen Aspekte: Proteinextraktion, Zelllyse, Proteinquantifizierung, SDS-PAGE, Membrantransfer, Antikörperinkubation, Chemilumineszenz- und Fluoreszenzdetektion, Bildaufnahme, Bandenquantifizierung, Normalisierung und Fehlerbehebung.
Die Teilnehmenden sammeln praktische Erfahrung mit zentralen Methoden der Proteinanalyse, wie sie in Molekularbiologie, Krebsforschung, Biotechnologie und biomedizinischen Laboren eingesetzt werden. Der Workshop verbindet Vorträge, Demonstrationen, Laboreinheiten, softwaregestützte Analysen und wissenschaftliche Diskussion.
Am Ende des Kurses verstehen die Teilnehmenden, wie Western-Blot-Experimente geplant, durchgeführt, analysiert und interpretiert werden.
Lernziele
Nach Abschluss des Workshops sind die Teilnehmenden in der Lage:
- die Prinzipien der Proteinanalyse und des Western Blotting zu verstehen
- die Sicherheitsrichtlinien für BSL-2-Labore anzuwenden
- Western-Blot-Experimente mit geeigneten Kontrollen zu planen
- Strategien zur Auswahl und Validierung von Antikörpern zu verstehen
- Zelllyse und Proteinextraktion durchzuführen
- die Proteinkonzentration zu bestimmen und Proben für die SDS-PAGE vorzubereiten
- die Herstellung von SDS-PAGE-Gelen und die Proteinauftrennung zu verstehen
- Proteine auf Membranen zu transferieren
- Blockierungsstrategien und die Prinzipien der Antikörperinkubation zu verstehen
- Chemilumineszenz- und Fluoreszenzdetektion zu vergleichen
- Bilder aufzunehmen und Banden zu quantifizieren
- Normalisierungsstrategien für Western-Blot-Daten anzuwenden
- typische Probleme beim Western Blot zu beheben
- Western-Blot-Ergebnisse im biologischen Kontext zu interpretieren
Zielgruppe
Dieser Kurs eignet sich besonders für:
- Master-Studierende und Promovierende
- wissenschaftliche Hilfskräfte und technische Assistentinnen und Assistenten
- Studierende der Biomedizin, Biotechnologie, Molekularbiologie und Life Sciences
- Forschende, die mit Proteinexpressionsanalysen arbeiten
- Wissenschaftlerinnen und Wissenschaftler, die in molekularbiologische oder onkologische Labore einsteigen
- Fachkräfte, die eine praxisnahe Schulung in Western Blotting und Proteinanalyse suchen
Kursprogramm
Tag 1: Grundlagen der Proteinanalyse & Probenvorbereitung
Schwerpunkt: Proteingrundlagen und Versuchsaufbau
| Uhrzeit | Inhalt | Format |
|---|---|---|
| 09:00–09:30 | Begrüßung & Kursüberblick | Vortrag |
| 09:30–10:30 | Einführung in die BSL-2-Richtlinien & Laborsicherheit | Vortrag |
| 10:30–11:15 | Prinzipien der Proteinanalyse & des Western Blotting | Vortrag |
| 11:15–11:30 | Kaffeepause | |
| 11:30–12:30 | Versuchsplanung, Kontrollen & Antikörperauswahl | Vortrag |
| 12:30–13:30 | Mittagspause | |
| 13:30–15:00 | Praxis: Zelllyse & Proteinextraktion | Labor |
| 15:00–15:15 | Kaffeepause | |
| 15:15–16:30 | Proteinquantifizierung & Probenvorbereitung für die SDS-PAGE | Labor |
| 16:30–17:00 | Fragerunde & Tagesabschluss | Diskussion & Fragerunde |
Tag 2: SDS-PAGE & Western-Blot-Ablauf
Schwerpunkt: Gelelektrophorese und Transfer
| Uhrzeit | Inhalt | Format |
|---|---|---|
| 09:00–09:30 | Überblick Tag 2 & Diskussion zur Fehlerbehebung | Fragerunde |
| 09:30–11:00 | Praxis: Herstellung von SDS-PAGE-Gelen & Proteinauftrennung | Labor |
| 11:00–11:15 | Kaffeepause | |
| 11:15–12:30 | Proteintransfer auf Membranen: Nass- und Semi-Dry-Transfer | Labor |
| 12:30–13:30 | Mittagspause | |
| 13:30–14:30 | Blockierungsstrategien & Prinzipien der Antikörperinkubation | Vortrag |
| 14:30–15:30 | Praxis: Inkubation mit dem Primärantikörper | Labor |
| 15:30–15:45 | Kaffeepause | |
| 15:45–16:30 | Detektionsmethoden: Chemilumineszenz & Fluoreszenz | Vortrag + Demo |
| 16:30–17:00 | Tagesabschluss | Diskussion & Fragerunde |
Tag 3: Detektion, Quantifizierung & Datenauswertung
Schwerpunkt: Analyse und Fehlerbehebung
| Uhrzeit | Inhalt | Format |
|---|---|---|
| 09:00–09:30 | Überblick Tag 3 | Vortrag |
| 09:30–11:00 | Praxis: Inkubation mit dem Sekundärantikörper & Signaldetektion | Labor |
| 11:00–11:15 | Kaffeepause | |
| 11:15–12:30 | Bildaufnahme & Bandenquantifizierung | Labor + Software-Demo |
| 12:30–13:30 | Mittagspause | |
| 13:30–14:30 | Datenanalyse & Normalisierungsstrategien | Vortrag |
| 14:30–15:15 | Typische Probleme & Fehlerbehebung beim Western Blotting | Diskussion |
| 15:15–15:30 | Kaffeepause | |
| 15:30–16:00 | Diskussion einer Fallstudie & Interpretation der Ergebnisse | Diskussion |
| 16:00–16:30 | Abschluss, Feedback & Zertifikate | Fragerunde |
Ihr Mehrwert
Die Teilnehmenden gewinnen:
- ein praxisnahes Verständnis von Western-Blot-Arbeitsabläufen
- praktische Erfahrung mit Zelllyse und Proteinextraktion
- Wissen zur Proteinquantifizierung und Probenvorbereitung für die SDS-PAGE
- praktische Erfahrung mit SDS-PAGE und Membrantransfer
- Verständnis von Antikörperauswahl, Blockierung und Inkubationsstrategien
- Einblick in Chemilumineszenz- und Fluoreszenzdetektion
- Erfahrung mit Bildaufnahme, Bandenquantifizierung und Normalisierung
- Strategien zur Behebung typischer Probleme beim Western Blot
- Vorbereitung auf selbstständige Proteinanalysen im Forschungslabor
