Kursdetails
Überblick
Dieser intensive dreitägige Praxiskurs bietet eine praxisnahe und strukturierte Einführung in PCR, quantitative Echtzeit-PCR (qPCR) und Genexpressionsanalyse.
Der Kurs umfasst den gesamten Arbeitsablauf: Versuchsplanung, Primerdesign, RNA-/DNA-Extraktion, RNA-Qualitätskontrolle, cDNA-Synthese, qPCR-Ansatz, Verfolgung der Amplifikation, Datenanalyse, Normalisierungsstrategien und biologische Interpretation.
Die Teilnehmenden erwerben theoretisches Verständnis und praktische Erfahrung mit zentralen molekularbiologischen Methoden, die in Forschung, Diagnostik, Biotechnologie und biomedizinischen Anwendungen eingesetzt werden. Der Workshop verbindet Vorträge, Demonstrationen, praktische Laboreinheiten, computergestützte Analysen und Diskussionen zur Fehlerbehebung.
Am Ende des Kurses wissen die Teilnehmenden, wie PCR- und qPCR-Experimente geplant, durchgeführt, analysiert und interpretiert werden – mit besonderem Augenmerk auf verlässliche Versuchsplanung und aussagekräftige Genexpressionsanalysen.
Lernziele
Nach Abschluss des Workshops sind die Teilnehmenden in der Lage:
- die Grundprinzipien der konventionellen PCR und der Echtzeit-qPCR zu verstehen
- die Unterschiede zwischen PCR- und qPCR-Arbeitsabläufen zu erklären
- die wesentlichen Aspekte der Versuchsplanung zu verstehen
- grundlegende Strategien des Primerdesigns für PCR- und qPCR-Experimente anzuwenden
- nach den Sicherheitsrichtlinien für BSL-2-Labore zu arbeiten
- Probenvorbereitung und RNA-/DNA-Extraktion durchzuführen
- Qualität und Menge der RNA vor nachfolgenden Anwendungen zu bewerten
- die Prinzipien der reversen Transkription und der cDNA-Synthese zu verstehen
- qPCR-Ansätze mit geeigneten Reagenzien und Kontrollen vorzubereiten
- Amplifikationskurven und Ct-Werte zu verstehen
- die ΔΔCt-Methode zur relativen Genexpressionsanalyse anzuwenden
- Normalisierungsstrategien für eine verlässliche Datenauswertung einzusetzen
- Genexpressionsergebnisse zu visualisieren und grundlegende statistische Aspekte zu verstehen
- typische technische Probleme bei PCR- und qPCR-Experimenten zu erkennen
- Strategien zur Fehlerbehebung und Best Practices anzuwenden
Zielgruppe
Dieser Kurs eignet sich besonders für:
- Master-Studierende und Promovierende
- wissenschaftliche Hilfskräfte und technische Assistentinnen und Assistenten
- Studierende der Biomedizin, Biotechnologie, Molekularbiologie und Life Sciences
- Forschende, die in die Molekularbiologie oder Genexpressionsanalyse einsteigen
- Fachkräfte aus Hochschul-, Diagnostik-, Biotech- oder Pharmalaboren
- Wissenschaftlerinnen und Wissenschaftler, die ihre Kompetenzen in PCR, qPCR und Datenauswertung stärken möchten
- Teilnehmende, die praxisnahe Genexpressions-Workflows von der Probenvorbereitung bis zur Analyse erlernen möchten
Kursprogramm
Tag 1: PCR-Grundlagen & Versuchsplanung
Schwerpunkt: Prinzipien, Primerdesign und Aufbau des Arbeitsablaufs
| Uhrzeit | Inhalt | Format |
|---|---|---|
| 09:00–09:30 | Begrüßung & Kursüberblick | Vortrag |
| 09:30–10:30 | Einführung in die BSL-2-Richtlinien & Laborsicherheit | Vortrag |
| 10:30–11:15 | PCR-Prinzipien: konventionelle PCR vs. qPCR | Vortrag |
| 11:15–11:30 | Kaffeepause | |
| 11:30–12:30 | Versuchsplanung & Strategien des Primerdesigns | Vortrag + Demo |
| 12:30–13:30 | Mittagspause | |
| 13:30–15:00 | Probenvorbereitung & RNA-/DNA-Extraktion | Labor |
| 15:00–15:15 | Kaffeepause | |
| 15:15–16:30 | RNA-Qualitätskontrolle & Quantifizierung | Labor |
| 16:30–17:00 | Fragerunde & Tagesabschluss | Diskussion & Fragerunde |
Tag 2: cDNA-Synthese & qPCR-Arbeitsablauf
Schwerpunkt: Reverse Transkription und Amplifikation
| Uhrzeit | Inhalt | Format |
|---|---|---|
| 09:00–09:30 | Rückblick auf Tag 1 & Überblick Tag 2 | Vortrag |
| 09:30–10:30 | Grundlagen der reversen Transkription & cDNA-Synthese | Vortrag |
| 10:30–10:45 | Kaffeepause | |
| 10:45–12:30 | cDNA-Synthese: Reaktionsansatz & Kontrollen (No-RT, NTC) | Labor |
| 12:30–13:30 | Mittagspause | |
| 13:30–14:15 | qPCR-Chemie: SYBR Green vs. sondenbasierte Detektion | Vortrag |
| 14:15–15:30 | qPCR-Plattenansatz: Master-Mix, Replikate & Kontrollen | Labor |
| 15:30–15:45 | Kaffeepause | |
| 15:45–16:30 | qPCR-Lauf & Schmelzkurvenanalyse | Labor + Demo |
| 16:30–17:00 | Fragerunde & Tagesabschluss | Diskussion & Fragerunde |
Tag 3: Genexpressionsanalyse & Datenauswertung
Schwerpunkt: Datenanalyse und biologische Interpretation
| Uhrzeit | Inhalt | Format |
|---|---|---|
| 09:00–09:30 | Rückblick auf Tag 2 & Überblick Tag 3 | Vortrag |
| 09:30–10:30 | Ct-Werte, ΔΔCt-Methode & Normalisierungsstrategien | Vortrag |
| 10:30–10:45 | Kaffeepause | |
| 10:45–12:30 | qPCR-Datenanalyse & Interpretation | Computer / Labor |
| 12:30–13:30 | Mittagspause | |
| 13:30–14:30 | Visualisierung & Statistik von Genexpressionsdaten | Vortrag + Demo |
| 14:30–15:30 | Fehlerbehebung & Best Practices | Diskussion |
| 15:30–16:00 | Mini-Quiz / Diskussion einer Fallstudie | Diskussion |
| 16:00–16:30 | Abschluss, Feedback & Zertifikate | Fragerunde |
Ihr Mehrwert
Die Teilnehmenden gewinnen:
- ein praxisnahes Verständnis von PCR- und qPCR-Arbeitsabläufen
- praktische Erfahrung mit Probenvorbereitung und RNA-/DNA-Extraktion
- praktisches Wissen zu RNA-Qualitätskontrolle und Quantifizierung
- Verständnis von Primerdesign und Versuchsplanung
- Erfahrung mit cDNA-Synthese und reverser Transkription
- praktische Einblicke in qPCR-Ansatz, Kontrollen und Optimierung
- Verständnis von Amplifikationskurven, Ct-Werten und qPCR-Messgrößen
- Kompetenz in der Genexpressionsanalyse mit der ΔΔCt-Methode
- Wissen zu Normalisierungsstrategien und grundlegender statistischer Auswertung
- Erfahrung in Datenvisualisierung und biologischer Interpretation
- Strategien zur Behebung typischer Probleme bei PCR und qPCR
- Vorbereitung auf selbstständiges Arbeiten in Molekularbiologie, Diagnostik, Biotechnologie und Genexpressionsforschung
